丁爱萍   谢良生   蓝翠钰   张艳春

（深圳市城管局园林科研所   518003）

摘要　以美人蕉茎尖为外植体进行快速繁殖。在MS+2mg/l BA+0.2mg/l NAA的培养基上得到愈伤组织，该愈伤组织在MS+5mg/1BA+1mg/l NAA的培养基上分化出不定芽。在MS+5mg/l BA的培养基上，接种茎尖直接长成无根新梢。在1/2MS+0.5mg/l NAA的培养基上，无根苗生根长成完整植株。6～8cm高小苗可出瓶移栽，成活率为100%。

　　关键词　美人蕉；茎尖培养；快速繁殖

　　美人蕉（Canna generalis Bailey）为我市主栽的行道花卉和花坛花卉之一，具有较强的观赏性。但由于多年来一直采用分切根状茎的方法进行繁殖，出现病毒病害及品种退化问题。连续的营养繁殖，使得病毒迅速传播，病情逐年加重。而病毒病害是药物防治不能消除的。采用现代生物技术方法对美人蕉进行茎尖脱毒，再用组织培养法获得无病毒种苗，进一步建立无病毒种苗无性系并进行快速繁殖，可迅速获得大批量优质、无病毒美人蕉种苗，从而，从根本上解决美人蕉花叶病问题。本文报道了美人蕉茎尖脱毒及建立美人蕉无病毒种苗无性系的研究结果。

1　材料与方法

1．1　材料

　　供试材料为大花美人蕉品种：深圳红，深圳粉，优丽，大金边，鸳鸯，总统，金脉，阿旺，二乔，橘红大花。

1.2　外植体处理

　　取带芽胞的美人蕉根茎，常规消毒后用75%乙醇棉擦拭，再用0.1% HgCl2消毒10分钟，无菌水冲洗5次。在超净台上，解剖镜下剥取茎尖，大小控制在0.5～1 mm，接种在培养基上。

1.3　培养基

　　脱分化培养基：MS+2 mg/l BA+0.2 mg/l NAA

　　分化培养基：MS+5 mg/l BA+1 mg/l NAA

　　直接生长培养基：MS+5 mg/l BA

　　生根培养基：1/2MS+0.5 mg/l NAA

1．4　培养条件

　　培养温度为28±2℃，光照强度为1500 Lux，每天光照10小时。

2　结果与分析

2．1　外植体接种污染率由50%降低到1～5%

　　由于所取外植体为生长在土壤中的根茎，含有大量杂菌，很难消毒，采用封闭式振摇灭菌法[1]，使大批量接种的接种污染率降低到5%以下。

2．2　诱导脱分化并形成愈伤组织

　　在脱分化培养基上，经30～40天培养有45～53%的外植体形成黄绿色形态较好的愈伤组织。供试的8个不同激素配比的培养基，其上接种的外植体，都或多或少地可产生愈伤组织，有的愈伤组织质地较硬，有的较疏松，这些愈伤组织转入分化培养基后，都不分化不定芽。只有在脱分化培养基上产生的黄绿色的愈伤组织转入分化培养基后，才会分化出不定芽。

２．3　诱导愈伤组织分化不定芽

　　将脱分化培养基上产生的愈伤组织转到分化培养基上，经约35天培养，大约80%的愈伤组织上可产生3～4个不定芽。

2．4　接种茎尖直接长大，形成无根新梢

　　在MS+5 mg/l BA培养基上，有约50%的接种茎尖，经40～50天培养，茎尖慢慢发育成芽。

2.5　不定芽扩大繁殖

　　长到2～3 cm高的不定芽，再转到MS+5 mg/l BA的培养基上，经30天培养，在每个芽的基部长出3～4个侧芽，这样，每个继代都以3～4倍的速度不断扩大繁殖。

2．6　形成完整植株

　　在繁殖过程中，将长到3 cm左右的小苗转到生根培养基上，经15天培养，可在基部长出3～4条根，这时即可出瓶移栽。

2．7　移栽成活

　　出瓶前，需打开瓶口，练苗2-3天，移栽时不可伤根。移栽的最佳温度为18～25℃，移栽初期应保持60%以上的相对湿度，并避免阳光直射，土壤使用普通园土即可。达到以上条件时，移栽苗成活率几乎达到100%。

3　讨论

　　美人蕉茎尖培养难度较大。首先。进行茎尖脱毒，需取小于1 mm的茎尖，才能保证脱除CMV病毒，但小茎尖培养成活难度较大，关键技术是剥取茎尖时勿使茎尖受伤褐化，操作速度又要快，勿使组织在空气中暴露时间过长。第二，茎尖培养成活后，诱导其分化出侧芽，需较大量细胞分裂素，但同时细胞分裂素过量，就会产生玻璃苗。关键技术是，将培养基中BA控制在5 mg/l，即可保证小苗以3～4倍的速率扩大繁殖，又可避免出现玻璃苗。第三，建立无病毒种苗无性系后要防止其老化，我们的经验是2～3年进行一次更新，以保持其较高的繁殖速率。

参考文献

[1]   丁爱萍等.红掌组织培养研究.中国花卉园艺，2003（5）：24-26.